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毛細(xì)管電泳引物探針質(zhì)控第二彈
來(lái)源: | 作者:201321492800086 | 發(fā)布時(shí)間: 1464天前 | 2244 次瀏覽 | 分享到:
引物是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中必不可少的部分,它通常是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個(gè)引物與靶區(qū)域一端的一條DNA模板鏈互補(bǔ),另一個(gè)引物與靶區(qū)域另一端的另一條DNA模板鏈互補(bǔ),其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn),核酸聚合酶可由其3’端開始合成新的核酸鏈。常用的人工合成寡核苷酸探針與引物類似,是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記,且順序是已知的,與目的基因互補(bǔ)的核酸。

引物是分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中必不可少的部分,它通常是人工合成的兩段寡核苷酸序列,一個(gè)引物與靶區(qū)域一端的一條DNA模板鏈互補(bǔ),另一個(gè)引物與靶區(qū)域另一端的另一條DNA模板鏈互補(bǔ),其功能是作為核苷酸聚合作用的起始點(diǎn),核酸聚合酶可由其3’端開始合成新的核酸鏈。常用的人工合成寡核苷酸探針與引物類似,是一段帶有檢測(cè)標(biāo)記,且順序是已知的,與目的基因互補(bǔ)的核酸。


分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常會(huì)因?yàn)橐锘蛘咛结樀膯?wèn)題導(dǎo)致產(chǎn)物擴(kuò)增不出或者引物二聚體含量很高無(wú)法確定產(chǎn)物質(zhì)量,即使換不同的酶調(diào)整退火溫度都沒有效果,所以擴(kuò)增前的質(zhì)控很有必要。前面我們已經(jīng)提到過(guò)(詳情查看鏈接https://mp.weixin.qq.com/s/MzfRLK-b4gh9gPGwaJv8nA)實(shí)驗(yàn)室一般采用PAGE方法進(jìn)行質(zhì)控,但是整個(gè)質(zhì)檢過(guò)程比較繁瑣復(fù)雜,耗時(shí)較長(zhǎng),且無(wú)法對(duì)主帶和雜帶進(jìn)行定量分析,更多靠經(jīng)驗(yàn)判斷樣本合格與否;有些單位也會(huì)采用毛細(xì)管電泳-質(zhì)譜聯(lián)用(CE-MS)技術(shù)來(lái)質(zhì)檢Oligo引物,不過(guò)質(zhì)譜儀價(jià)位較高,用于引物質(zhì)控會(huì)提高引物合成的成本。Qsep系列全自動(dòng)毛細(xì)管電泳儀有著高分辨率、高靈敏度和通量靈活等特點(diǎn),在引物和探針質(zhì)控中有著得天獨(dú)厚的優(yōu)勢(shì),是進(jìn)行引物質(zhì)控的不二選擇。


前面的文章中我們已經(jīng)展示過(guò)Qsep系列引物質(zhì)控的一些相關(guān)結(jié)果,而最新的小片段ladder為引物和探針質(zhì)控添磚加瓦(圖1),可通過(guò)峰圖上的片段大小及峰的占比,可以更加直觀的看出結(jié)果的質(zhì)量情況(圖2,3,4)。

圖1 120nt ladder

圖2 質(zhì)量較好引物質(zhì)控結(jié)果

圖3 質(zhì)量較差引物質(zhì)控結(jié)果

圖4 探針質(zhì)控結(jié)果