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意義重大的 cfctDNA 樣本，你做好質(zhì)控了嗎？
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作者:201321492800086
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發(fā)布時間: 1135天前
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Qsep 系列全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)
?游離 DNA（cell-free DNA，cfDNA）是一種血液或體液中游離于細胞之外的 DNA。在某些疾病或特殊狀態(tài)下，細胞也會釋放游離 DNA 入血，其中包括來源于腫瘤細胞的循環(huán)腫瘤 DNA（Circulating tumor DNA，ctDNA），來源于胎兒的 cfDNA 等。隨著有效的 cfDNA 分離技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展，cfDNA 用于疾病早期診斷、預后評估、療效監(jiān)測等方面的潛在價值受到越來越多的關(guān)注。檢測血漿或血清中 cfDNA 可視為一種"液體活檢"，有利于開展各種相關(guān)診斷，并能避免有創(chuàng)的組織活檢。以血液為檢測標本，使重復采集檢測樣本成為了可能，從而有利于對疾病的發(fā)展及腫瘤的治療過程進行跟蹤監(jiān)測。
ctDNA 在腫瘤精準醫(yī)療中的應用
有研究發(fā)現(xiàn)，Ⅳ 期癌癥患者的 ctDNA 濃度與Ⅰ期患者相比增加了 100 倍，表明血漿中 ctDNA 的濃度可能與腫瘤發(fā)展階段相關(guān)。而癌癥的早期干預可明顯改善患者生存質(zhì)量，研究顯示 82% Ⅳ 期癌癥患者檢測到 ctDNA，而Ⅰ期患者檢出率在 47%。
cfDNA 中的甲基化和核小體占有模式可以編碼組織特異性和細胞特異性信息。研究血漿中組織特異性甲基化信號，使每個組織對整個 cfDNA 池的相對貢獻量子化，這使得今后通過測定組織特異性 ctDNA 來確定癌癥轉(zhuǎn)移擴散部位或位點成為可能，即提示了來自液體活檢的原始組織信息可能有助于腫瘤定位。
無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷
產(chǎn)前診斷是預防出生缺陷的主要干預措施之一。孕婦外周血中胎兒游離核酸的發(fā)現(xiàn)為無創(chuàng)性產(chǎn)前診斷及妊娠相關(guān)疾病提供了新的途徑。因胎兒游離核酸具有含量豐富、出現(xiàn)時間早且產(chǎn)后迅速清除等特點，更加適用于產(chǎn)前診斷，胎兒性別鑒定和 RHD 血型分型、孟德爾疾病、異倍體檢測、妊娠合并癥方面的應用。
游離核酸與自身免疫病、器官移植、腎癌和肝細胞肝癌等也有著密切關(guān)系。
盡管 ctDNA 與臨床表型的相關(guān)性已得到證實，但要提高其在臨床應用的準確性，仍需大規(guī)模人群隊列研究，而提高 cf/ctDNA 樣本的質(zhì)量是成功應用的關(guān)鍵，因此對 cf/ctDNA 的質(zhì)控非常重要。從血液中提取的 cf/ctDNA 濃度一般都極低，而且體積有限，傳統(tǒng)瓊脂糖電泳和常規(guī)儀器很難檢測到，更不用說對樣本分子量大小及大片段污染的質(zhì)控。這時就需要一款專業(yè)且靈敏度高的核酸質(zhì)控儀器，而 Qsep 系列全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)就是 cf/ctDNA 樣本質(zhì)控的不二選擇。
Qsep 系列全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)憑借其高靈敏度 N1 卡夾，能輕松完成cf/ctDNA這類極低濃度核酸樣本的質(zhì)控，且速度快，樣本需求量少。cf/ctDNA 樣本質(zhì)控最關(guān)鍵的兩個參數(shù)是分子量大小以及是否有大片段污染，而這兩個參數(shù)都能會在 Qsep 檢測結(jié)果中直接顯示，使樣本質(zhì)量的高低一目了然。
圖 1 Qsep 系列全自動核酸蛋白分析系統(tǒng)
實際案例
圖 2 0.07ng/ul cfDNA 質(zhì)控結(jié)果
圖2為Qsep設備上檢測的一個濃度只有 0.07ng/ul 的cfDNA 樣本。如圖所示，低濃度的cfDNA在Qsep儀器上能檢測到明顯的樣本峰，且同一樣品三次重復測試結(jié)果顯示峰形完全一致。
圖 3 不同質(zhì)量 cfDNA 樣本質(zhì)控結(jié)果
圖3是兩個不同質(zhì)量 cfDNA 樣本的質(zhì)控結(jié)果圖。從圖中可以看出樣本B的主峰明顯，且大于 1000bp 的部分基本沒有大片段殘留，是一個合格的 cfDNA 樣本；而樣本A 在大于 1000bp 的區(qū)域仍存在明顯的樣本峰，說明該樣本有大片段污染，是一個不合格的 cfDNA 樣本。
